流式焦亡

一、实验原理：

细胞焦亡(Pyroptosis)又称细胞炎性坏死，是程序性细胞死亡的一种，主要通过炎症小体介导包含半胱天冬酶-1(Caspase-1)在内的多种Caspase的激活，Caspases通过切割gasermin D(GSDMS)的氨基端和羧基端的连接体,造成细胞穿孔，进而引起细胞死亡。

二、实验方法

1. 细胞培养所需时间后，收集细胞，1200rpm，5min离心，去上清，加300μl PBS重悬；

2. 转移290μl细胞悬液至新的EP管中，加入10μl 30X FLICA溶液，37℃避光孵育1h，每20min轻轻混匀一次（同时设阴性对照，即正常细胞不加FLICA和PI；阳性对照1，以凋亡效果最明显的溶剂组作为阳性对照，只加FLICA单标；阳性对照2，以凋亡效果最明显的溶剂组作为阳性对照，只加PI单标。）；

3. 孵育1h后，加入1ml 1X Apoptosis Wash Buffer，混匀，1200rpm，5min离心，弃上清；

4. 用1X Apoptosis Wash Buffer将细胞再润洗1次，1200rpm，5min；

5. 加入400μl 1X Apoptosis Wash Buffer重悬细胞，放置冰上；

6. 流式检测前，加入2μl PI，混匀；

7. 流式细胞仪上机检测。